谷氨酰胺合成酶（GS）測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)操作

谷氨酰胺合成酶（GS)測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)操作

測(cè)定意義：GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對(duì)生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。
測(cè)定原理：GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物；該絡(luò)合物在540nm 處有最大吸收峰，可用分光光度計(jì)測(cè)定。
所需的儀器和用品：可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品說明： GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺， 不僅可以防止過多的銨離子對(duì)生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。 GS 在ATP和Mg 2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ-谷氨酰基異羥肟酸， 在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物；該絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
谷氨酰胺合成酶（GS)測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)操作
 

樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體 積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功 率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。