人趨化因子C-C-基元受體1（CCR1） 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒原理

人趨化因子C-C-基元受體1（CCR1） 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人趨化因子C-C-基元受體1（CCR1）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人趨化因子C-C-基元受體1（CCR1）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

1.  檢測范圍：0.25 ng/mL – 8 ng/mL。

2.  靈敏度：檢測濃度小于0.1 ng/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構類似物交叉反應。

重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 

 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測

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